任务二　样品检测与数据采集

任务引入

任务目标

1.会填写原始记录表格。

2.会配制所需的标准溶液。

3.会样品处理。

工作页

（一）任务分析

1.明晰任务流程

2.任务难点分析

萃取操作。

3.条件需求与准备

（1）仪器

①紫外-可见分光光度计。

②容量瓶：250mL、100mL。

③水浴锅。

④离心机。

（2）试剂

①甲醇。

②0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液。

③溴麝香草酚蓝溶液（72mg/L）。

④氯仿。

⑤无水硫酸钠。

⑥环维黄杨星D对照品。

（二）任务实施

活动1　试剂配制

活动2　对照品溶液的制备

精密称取环维黄杨星D对照品约25mg，置250mL容量瓶中，加甲醇70mL使溶解，用0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL至100mL容量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL含环维黄杨星D10μg）。

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对照品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质，对照品由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应，除了另有规定外，对照品应置于五氧化二磷减压干燥器中干燥12h以上使用。对照品的建立或变更其原有活性成分的含量，应与原对照品进行对比，并经过协作标定和一定的工作程序进行技术审定。对照品应附有使用说明书，标明质量要求、使用期限和装量等。

活动3　供试品溶液的制备

取供试品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当环维黄杨星D0.5mg），置50mL容量瓶中，加0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液至近刻度，80℃水浴恒温1.5h后取出，冷却至室温，加0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液至刻度，摇匀，离心6min（转速为3000r/min），取上清液，即得。

活动4　显色及萃取

精密量取上述供试品溶液与对照品溶液各5mL，分别置分液漏斗中，各精密加入溴麝香草酚蓝溶液5mL，摇匀，立即分别精密加入氯仿10mL，振摇2min，静置1.5h，分取氯仿层，置于含0.5g无水硫酸钠的具塞试管中，振摇，静置，取上层清液进行测定。

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供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定。用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标准品同时操作。除另有规定外，比色法所用的空白指用同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度后，按比较法公式计算供试品的浓度。

活动5　数据测定

使用紫外-可见分光光度计，分别在410nm波长处，以氯仿为参比，测定对照品和供试品的吸光度，填入表3-3。

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测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除另有规定外，吸收峰波长应在规定的波长±2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3～0.7之间为宜。

仪器的光谱带宽应小于供试品吸收带半宽度的1/10，否则测得的吸光度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。

由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。

采用对照品比较法时，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100％±10％，所用溶剂也应完全一致。

含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度，在220～240nm范围内不得超过0.40，在241～250nm范围内不得超过0.20，在251～300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。

（三）任务实施记录（见表3-3）

（四）任务评估（见表3-4）

思考题

简答题

1.何谓对照品？

2.分光光度法测定环维黄杨星D的显色剂是什么？萃取剂是什么？空白溶液是什么？测定波长是多少？