第五章 神经组织切片的制作

实验3 观察大鼠脑组织大体结构——学习马利根厚片染色法

【实验目的】

利用马利根染色法可将大脑灰质与白质染成不同颜色的特点，观察区分灰、白质及灰质核团分布的位置，学会从冠状面、矢状面认识大脑内部结构。

【理论基础】

马利根大脑厚片染色法最早于1931年开始使用，由发明人Milligan的名字命名，经过反复实验和改造，现已较为成熟适用。

厚切片是观察脑内部结构的方法之一。脑片厚度为1.1～2mm，甚至20mm或更厚。利用马利根染色法染色，可分别将灰质与白质染成不同的颜色，借以用肉眼观察区分灰质、白质以及灰质核团的分布位置。

【实验对象】

兔或大鼠脑组织标本一个。

【实验用品】

（1）常用手术器械一套，量杯，量筒，弯盘，竹夹，玻璃棒，温度计，电炉，刀片。

（2）药品

① 固定液：10%福尔马林。配制方法：10mL的甲醛水溶液加入90mL的蒸馏水配制而成。

② 染液Ⅰ：石炭酸40g，硫酸铜5g，浓盐酸1.25～1.5mL，蒸馏水1000mL。

③ 染液Ⅱ:1%三氯化铁500mL，加入0.2%冰醋酸。

④ 显色液：1%亚铁氰化钾水溶液。

⑤ 保存液：含有2%盐酸的10%福尔马林。

⑥ 黏片液：10%～15%明胶水溶液。

【实验内容】

（1）剥取动物脑组织后用10%福尔马林固定。

（2）切片：1～2mm厚。注意：① 切片刀用热水清洗；② 切记，不得来回拉刀，一刀切到底。

（3）冲洗：流水冲洗1～2天，蒸馏水洗12小时（或水洗24小时，蒸馏水过夜）。

（4）浸脑厚片：浸入染液Ⅰ5 min。注意：① 此液必须浸没脑片，高出脑片3～5cm; ② 用竹夹（或玻璃棒，禁用金属镊子）将脑切片放入温度加热至60～65℃的染液中，并不断翻动，直至切片呈青白色；③ 温度不得高于70℃，否则颜色过深；④ 按染液Ⅰ配方配制溶液一份，可染人大脑厚片6～7片。

（5）5 min后取出，即放入大量冰水中浸洗2 min。

（6）浸入染液Ⅱ1～3 min，直到灰质部分明显可见时取出，时间约为2 min。

（7）流水冲洗1 min，时间不可过长，超过1 min后脑片上的鲜蓝色将变成灰蓝色。

（8）浸入显色液1～3 min，此时灰质呈蓝色，白质颜色不变。

（9）流水冲洗5～10 min，时间过长脑片将会褪色。

（10）结果：白质无色，灰质深蓝，界限分明；若脑组织新鲜，灰质着色后可显示微小核团，比未灌注固定液的脑厚片显色效果更好。

（11）保存方法：① 存放于含有2%盐酸的10%福尔马林液中，使脑厚片保存鲜艳的深蓝色。② 用毛笔将热的10%～15%明胶水溶液涂于脑厚片的一面，然后贴在玻片上，轻压排出气泡，待明胶冷却后，存放于10%的福尔马林液中。此法较方法 ① 效果更好。

（周茵）