第一节　病理学检查的主要方法

眼眶病理的主要任务是确定眼眶病变的性质，包括肿瘤或非肿瘤性病变、良性或恶性肿瘤、肿瘤的类型、肿瘤侵犯范围和边界是否清楚。大多数眼眶肿瘤通过石蜡切片、HE染色和光学显微镜下观察就可以作出比较准确的病理诊断。有些病变为了确定组织来源和分型，需要进一步免疫组织化学染色或组织化学染色。有些特殊的病变可以通过电子显微镜观察或细胞遗传学检测，这两种方法是病理检查的辅助手段，诊断中必须要结合临床和光镜下的组织形态。

一、石蜡切片和HE染色切片的光学显微镜观察

目前最常用的病理学检查方法仍然是组织病理学诊断技术，采用石蜡包埋切片、HE染色和光学显微镜下观察。这种常规的病理学方法是病理学诊断的基础。手术标本取出后，立即放入10%中性甲醛（福尔马林）固定液中固定，经过标本取材、梯度酒精脱水、组织透明、浸蜡包埋后，制作成4μm厚度的切片和采用HE染色。制作优质的HE染色的病理切片是保证准确的病理诊断的重要条件。有些眼眶肿瘤体积较大，固定液不容易渗入到组织内部，应做适当切开后放入较大容器中，加入固定液的体积一般应超过标本的10倍。有些标本可根据不同需要选择其他组织固定液。组织标本的取材应切取病变典型部位和肿瘤与正常组织的交界部位，组织厚度一般为2～3mm。眼眶内骨性肿瘤或伴有骨化及钙化的标本，需要进行脱钙后才能进行切片，通常是采用15%甲酸或5%硝酸水溶液浸泡数天（根据骨化组织的体积大小），充分水洗后再进行取材和制作组织切片。

二、免疫组织化学染色

免疫组织化学染色是一种用已知抗体或抗原在组织切片上检测组织和细胞内相应未知抗原或抗体的特殊组织化学技术，目前已成为病理学诊断和研究中常规的染色技术。临床病理诊断工作中，免疫组织化学染色主要应用于肿瘤组织类型的鉴别诊断、淋巴细胞性肿瘤的分类、肿瘤增殖活性、肿瘤预后推测和指导靶向治疗药物的选择。眼眶肿瘤性病变中最常用于淋巴细胞性肿瘤的诊断和分类、软组织肿瘤鉴别诊断和某些特殊肿瘤的诊断。用于免疫组织化学染色的抗体很多，目前几乎不存在100%绝对特异性或敏感性的抗体，有些肿瘤细胞在不同分化阶段阳性表达常不同，因此通常需要结合肿瘤的组织形态特点，选配一组有关抗体进行检测。由于受抗体质量、技术操作、组织固定等多种因素的影响，免疫组织化学染色结果的解释必须结合HE染色切片的光镜形态和其他检查资料进行综合分析。应当认识到免疫组织化学染色仅是对肿瘤组织学诊断的辅助，而不是替代。

三、特殊染色和组织化学染色

特殊染色和组织化学染色是与常规HE染色相对而言的组织切片染色技术，主要用来显示肿瘤中特定组织结构或其他特殊成分，以辅助肿瘤或某种病变的病理诊断。在眼眶病变或肿瘤的病理诊断中，多用于结缔组织纤维、肌肉组织、神经组织、脂类物质、糖类、黏液和淀粉样物质的鉴别或检测，常用的特殊染色包括Masson三色染色、Van Gieson苦味酸酸性复红、网状纤维染色、PTAH染色、PAS染色、阿尔辛蓝、刚果红等方法。由于免疫组织化学技术的迅猛发展和广泛应用，特殊染色和组织化学染色的应用日趋减少，但在病理学诊断和某些疾病研究中仍然有不可忽视的作用。

四、电镜

对大多数临床病理检查的病例采用HE染色或结合免疫组织化学染色和特殊染色，在光学显微镜下观察通常可作出正确的病理诊断。但有些特殊的肿瘤则需要通过电镜下观察肿瘤细胞的超微结构，以识别肿瘤细胞的组织类型，辅助于病理诊断和相关疾病的研究。病理诊断中主要是使用透射电镜检查。电镜诊断的依据是肿瘤细胞具有其相应正常细胞的某种超微结构特征，如根据有无细胞间连接来区分低分化癌和肉瘤，神经内分泌癌细胞的胞质内可找到神经内分泌颗粒，组织细胞增生症X的瘤细胞内可找到朗格汉斯（Langerhans）颗粒（又称Birbeck小体），神经母细胞瘤的瘤细胞间有神经突起，内含许多微管、微丝和神经分泌颗粒等。电镜下观察的范围较小，必须结合光镜和其他方法才能作出正确诊断，一般不用电镜检查来区分肿瘤的良、恶性。电镜检查更多地用于肿瘤和某些疾病的研究，以及某些特殊或罕见肿瘤的诊断方面。

五、分子遗传学技术

目前研究表明大多数肿瘤都存在克隆性细胞和分子遗传学异常，尤其是淋巴细胞性肿瘤、软组织肿瘤和白血病常具有频发性和非随机性特征，这些遗传学异常不出现于其他肿瘤中，有较高的特异性，因此可以作为病理学诊断、分类、预后评估的一种辅助手段。目前采用的方法包括荧光原位杂交（FISH）技术、比较基因组杂交技术（CGH）、流式细胞术（FCM）、原位PCR技术、Southern印迹杂交技术和聚合酶链式反应（PCR）技术。这些检测方法多应用于眼眶软组织肿瘤、淋巴细胞性肿瘤的诊断和分类方面。